上述诊断步骤适用于初来就诊，一时尚缺乏闭经病因线索的患者。临床上有时通过病史和体检，即可发现闭经的病原线索，这时可根据病情需要直接采用特种辅助诊断措施以明确诊断。常用的辅助诊断法如下：
1、诊断性刮宫此法适用于已婚妇女对疑有生殖道结核，或闭经发生在人工流产后的患者，经刮宫可以了解子宫腔的大小宫颈或宫腔有无粘连。刮出的子宫内膜作病理切片检查，可间接了解性激素的分泌情况以及诊断子宫内膜结核。
2、子宫输卵管碘油造影有助于诊断生殖系统发育不良宫腔粘连及生殖道结核等。
3、外周血染色体检查对原发性闭经应常规行外周血染色体检查，特别是身材矮小、发育迟缓乳房不发育或外生殖器畸形者，更应检查染色体组型，以明确闭经的原因。
4、蝶鞍多向断层摄片主诉闭经合并泌乳的患者应进行蝶鞍多向断层摄片。蝶鞍多向断层摄片可发现3～10mm大小的微型腺瘤，表现为蝶鞍前壁下方的一侧凸出与蝶鞍底板前方或后方侵蚀。
5、腹腔镜检查可直接观察子宫输卵管和卵巢的形态，并可作卵巢活组织检查，对诊断卵巢早衰或多囊卵巢综合征有帮助。
6、甾体激素放射免疫法测定在闭经诊断的第一步骤中要求对体内雌激素水平作出初步估计。用放射免疫法测定血中甾体激素可提供闭经病因的诊断，例如血E2很低合并FSH异常增高时，提示卵巢功能衰竭；血睾酮增高常提示有多囊卵巢征群，或有分泌雄激素肿瘤存在的可能；含Y染色体的闭经患者也可能有血睾酮增高现象。
7、甲状腺功能测定考虑闭经与甲状腺功能异常有关时应进行吸碘试验及T3、T4测定。有的高催乳素血症患者可能是由于原发性甲状腺功能减退所引起。
8、肾上腺功能测定怀疑闭经与肾上腺功能异常有关时可进行尿17-酮和17-羟测定。
