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这类聚丙烯酰胺凝胶是在核苷酸碱基配对抑制剂(尿素或甲酰胺)的存在下聚合而成,变性DNA的移动速度同其碱基组成及序列几乎完全无关,故可用于分离及纯化单链DNA片段和DNA测序等
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中文名凝胶电泳外文名Gelelectrophoresis或称胶体电泳用于分离不同物理性质分为琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳1基本原理2琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳3脉冲电场凝胶电泳4应用5决定因素琼脂糖浓度电源电压离子强度影响凝胶电泳基本原理编辑凝胶电泳的原理比较简单
由于在电泳中使用了一种无反应活性的稳定的支持介质,如琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺胶等,从而降低了对流运动,故电泳的迁移率又是同分子的摩擦系数成反比的
如此时改变电场方向,则DNA分子必须改变其构象,沿新的泳动方面伸直,而转向时间与DNA分子大小关系极为密切
变性梯度凝胶电泳(denatured gradient gel electrophoresis,DGGE)最初是Lerman 等人于20 世纪80 年代初期发明的,起初主要用来检测DNA 片段中的点突变。Muyzer 等人在1993 年首次将其应用于微生物群落结构研究 。后来又发展出其衍生技术,温度...
不同的双链DNA片段因为其序列组成不一样,所以其解链区域及各解链区域的解链浓度也是不一样的。当它们进行DGGE时,一开始变性剂浓度比较小,不能使双链DNA片段最低的解链区域解链,此时DNA片段的迁移行为和在一般的聚丙烯酰胺凝胶中一样。然而一旦DNA片段迁移到一特定位置,其变性剂浓度刚好能使双链DNA...
1,在 PCR 反应过程中加入“ GC 夹板”( Top1992 年),由一端进行 PCR 反应的引物有:带有 15bp 碱基接头的引物和由 15bp 接头和 35bp “ GC 夹板”构成的接头 / 夹式引物。当然这就要求一个用特定引物扩增,另一个用带有“夹板”的引物扩增,而且要用校读多聚酶( P...
1、凝胶电泳:扩增反应结束后,取出反应管,冷却至室温,取10μl扩增产物用5%-7%聚丙烯酰胺凝胶或1.5%琼脂糖电泳,溴化乙锭染色,紫外分析仪下分析结果,分子量约为450bp处出现明显的DNA带。
蛋白质分子量测定较多用的是SDS(十二烷基磺 酸钠) 凝胶电泳法,这种方法最适宜的测定分子量是 15000~100000 的样品,对低于10000 分子量的水解 蛋白不太适用。通过改进,用强电解质离子为前导离 子和拖尾离子,可对分子量低于10000 的水解蛋白样 品进行分子量测定。
凝胶电泳电源电压在低电压时,线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比
凝胶电泳通常用于分析用途,但也可以作为制备技术,在采用某些方法(如质谱(MS)、聚合酶链式反应(PCR)、克隆技术、DNA测序或者免疫印迹)检测之前部分提纯分子
变性梯度凝胶电泳的发展经过: 1979 电泳系统发明( Fisher 和 Lerman)1979 年, 1983 分离仅有一个碱基之差的 DNA 双链 (Fisher 和 Lerman)1983 年, 1985 于基因组 DNA 中检测出一地中海贫血突变 (Myers 等) ;1985 年 使用异源...
Marker应该选择在目标片段大小附近ladder较密的,这样对目标片段大小的估计才比较准确
英文是Gel electrophoresis
3个回答
凝胶电泳DNA分子的构象DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关
(4)样品配制与加样DNA样品用适量TrisEDTA缓冲液溶解,缓冲液内含有0.25%溴酚蓝或其他指示染料,含有10%15%蔗糖或5%~10%甘油,以增加其比重,使样品集中
凝胶电泳:一般可以用非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳可以检测变性和天然状态的蛋白质,或用非还原的聚丙烯酰胺电泳检测有二硫键的蛋白复性后二硫键的配对情况。
经过化学修饰的低熔点(LMP)的琼脂糖,在结构上比较脆弱,因此在较低的温度下便会熔化,可用于DNA片段的制备电泳
凝胶电泳中蛋白质的着色不仅影响蛋白质分离的分辨率,同时也影响后续的质谱鉴定
pcr实验室图1四间PCR实验室区域设置如果使用全自动分析仪,各区域可适当合并,我们建议将扩增区和产物分析区合并为扩增检测区即共三个间,布局见图2
电泳时通常每一泳道至少加1mg合成的寡核苷酸,电泳后在紫外灯下定位寡核苷酸条带,将长度正确的寡核苷酸从凝胶上切下
变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE) 利用由碱基序列所决定的DNA片段溶解度或变性度的差异,达到分离野生型与突变型DNA片段的目的,该手段分辨率达一个碱基。当DNA 双链沿变性剂浓度梯度增加的聚丙烯酰胺凝胶迁移时,DNA分子中解...
4,最后,从安全角度出发,Guldberg等人(1994年)介绍了一种方法,将甲酰胺从恒变性剂凝胶电泳中去掉,他们还推测可以将变性剂从变性梯度凝胶电泳中去掉。
变性梯度凝胶电泳(DGGE)是一种根据DNA片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。DGGE将凝胶设置在双重变性条件下,可以检测DNA分子中的任何一种单碱基的替代、移码突变以及少于10个碱基的缺失突变。由于具有精密控温系统,比一般聚丙烯酰胺凝胶电泳具有更高的可重复性,被广泛应用于基因突变检测及相关研究。
步骤 1 仪器设备。已在很多场合下对此有所叙述(见下文),但也可以由研究者通过商业途径获得或自己制做。简要地讲,把凝胶灌到盒子里然后放入大的加热培养槽中,加入经充分搅拌的缓冲液。然后,将一个电极(阳极)与这个缓冲液相连,另一个电极(阴极)与上端的缓冲液相接,它可以将凝胶顶部与培养槽或低处缓冲液隔开。...
2,去除“ GC 夹板”或用化学“夹板”代替可能都会使操作简便( Costes 等 1993 年 a ; Fernandez 等 1993 年)。此外,“ GC 夹板”由连接补骨脂的多个碱基 A 替代,经过扩增,它就会与新加上去的配对碱基 T 结合在一起,经光照射后与末端共价连接在一起。现已对此方法...
凝胶电泳是当前研究核酸的最常用方法,凝胶电泳有琼脂糖(agarose)凝胶电泳和聚丙烯酰胺(polyacrylamide)凝胶电泳